基孔肯雅热IgG检测试剂盒（酶联免疫法）

【产品名称】

通用名称：基孔肯雅热IgG检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：Chikungunya IgG micro-capture ELISA

【产品规格】

96T

【预期用途】

试剂盒可用于人血清和血浆（柠檬酸盐）中基孔肯雅热IgG抗体的定性检测。

【检测原理】

试剂盒采用酶联免疫法。微孔中预包被有抗人IgG，用于结合样品中相应的抗体。洗板后，去除非结合的样品。再加入基孔肯雅热抗原液，再次洗板后，再加入生物素化的基孔肯雅热抗体。加入链霉亲和素标记结合物（酶联物），与固相的特异性的基孔肯雅热复合物结合。加入TMB底物液后，微孔中显蓝色。显色的强度与病人样品中基孔肯雅热IgG抗体的量成正比。加入终止液终止酶反应，形成黄色终点产物。后在酶标仪处450 nm读数。

【检测方法】

试剂准备

试验前，将所有试剂，样品，质控品平衡至室温(20~25℃)

基孔肯雅热抗原：

每瓶加入1mL稀释洗涤液溶解，缓慢加入，室温下静置温育15min，制成即用型抗原液。此抗原液在2~8 ℃可稳定保存1天。

洗涤液：

1个单位的浓缩洗涤液+19个单位的双蒸水。

如：10mL浓缩洗涤液+190 mL双蒸水。稀释洗涤液在室温下能稳定保存5天。开瓶后，浓缩的洗涤液在2~8℃可稳定保存至有效期.

检测步骤

试验前，仔细阅读说明书。严格执行说明书要求才能得到优质结果。如试验使用自动洗板机，建议每孔350µL，洗板5次（如手工洗，则每孔300µL，洗板3次）。试验前，确定好样品，质控品的加样布局方案。取所需板条置于板架上。

至少设

1孔（如A1）         空白对照

1孔 (如B1)          阴性质控

2孔 (如C1+D1）      临界质控

1孔（如E1）         阳性质控

如觉得有必要，建议样品和质控品都作双份检测。

试验应按同样的加样顺序加取试剂，避免不同的时间间隔造成误差。

使用新的一次性加样枪头，加各质控品，样品

调节恒温箱为37±1℃

• 加50µL质控品和稀释样品至相应各孔中，设A1作为空白对照
• 封板纸盖板
• 37 ± 1 ℃温育1小时±5分钟
• 温育后，移除封板纸，倒出微孔内液体，每孔用300µL稀释洗涤液，洗板3次，避免洗涤液相互溢溅至其它微孔。每次洗板时，浸泡时间应大于5秒。后，在吸水纸上拍干，去除残留液滴。

注意：洗涤步骤很关键。不充分的洗板，会导致不精确或错误上升的吸光度值。

• 除空白对照孔（A1）外，加50µL基孔肯雅热液抗原液至各孔，盖板
• 室温下温育30分钟
• 重复步骤4
• 除空白对照孔（A1）外，加50µL 基孔肯雅热液抗体液至各孔，盖板
• 室温下温育30分钟
• 重复步骤4
• 除空白对照孔（A1）外，各加50µL链酶亲和素酶联物至各孔，盖板
• 室温下温育30分钟
• 重复步骤4
• 加100 µL TMB底物液至各孔中
• 黑暗处，精确温育15分钟
• 按加TMB底物液的顺序和速度，加100 µL终止液至各孔中。

蓝色溶液在孵育过程中变为黄色。

注意：强阳性样品会导致色原产生沉淀，沉淀的产生会对读数产生影响。所以先用阴性基质进行预稀释，建议1：1的比例稀释，然后，再1个单位的预稀释样品+100个单位的样品稀释液。终结果（以U计算）乘以预稀释因子2即可

• 加入终止液后，30分钟内，在酶标仪450/620 nm处读数

【结果计算】

用A1空白对照孔对酶标仪进行调零

如遇技术问题，酶标仪不能调零。 所测样品的吸光度值减去空白对照的读数值，

即可得到可靠的读数。

在酶标仪处450 nm处测读所有质控品和样品的吸光度值。620 nm作为参考波长。

如进行双孔检测，计算吸光度均值。

实验有效性标准

如试验有效，必须满足以下要求

·空白对照（A1）：       吸光度值<  0.100

·阴性质控（B1）：       吸光度值<  临界读数

·临界质控（C1+D1）     吸光度值   0.150~1.300

·阳性质控（E1）        吸光度值>  临界读数

如上述标准没满足，试验视为无效，试验应重测。

结果计算

临界读数是双孔临界质控的吸光度均值

示范： 临界吸光度值0.39 +临界吸光度值0.37＝0.76 / 2 = 0.38

即吸光度值＝0.38

德国IBL基孔肯雅热IgG检测试剂（酶联法)